土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase,

S-NAG）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

S-NAG 是溶酶體中的一種酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG 活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

測定原理：

S-NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算NAG 活性。

自備用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：甲苯 5mL×1 瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：粉劑×2 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入 6mL 蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存；

試劑三：液體 25mL×1 瓶，4℃保存； 試劑四：液體 50mL×1 瓶，4℃保存； 樣品處理：

新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干，過 30~50 目篩。

測定步驟：

混勻， 37℃振蕩反應(yīng) 1h 后，立即 90℃水浴 5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻 10000g 25℃離心 10min，取上清液

充分混勻，室溫靜置 2min 后，400nm 處蒸餾水調(diào)零，測定吸光值 A，計算 ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

S-NAG 活力計算：

標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.00645x -0.0054；x 為標準品濃度（μmol/L），y 為吸光值。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1 μmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG 活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V 反總÷W÷T =68.84×(ΔA+0.0054)

T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：9.25×10-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.05g。